DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和方法步骤 – DNA技术

一、试验任务

深思和能力所及琼脂糖电泳疗法评议dna的规律和方式。

二、试验规律

琼脂糖凝胶电泳疗法是用于别离、DNA零件的评议和洗净的规范方式。琼脂糖是从琼脂中抽象派艺术作品的糖淀粉。,具水生,但不免费,这是一个人晴朗的的电泳疗法支撑物。。DNA在碱性制约有负电荷(缓冲器)。,经过凝胶说得中肯正电极在电场,变化多的的DNA分子零件的变化多的取决于它们的分子,在电场中,游水的作为毕生职业的是变化多的的。。胡米溴铵(EB)可以嵌入到DNA分子诞生荧光灯,紫外线辐射线投射后,可以区别变化多的的区域。,使掉转船头别离、分子辨别,滤光器重组子的任务。

三、试验资料

试验14抽象派艺术作品dna战利品,

四、方法和药品

    电泳疗法仪,电泳疗法槽,紫外线辐射行程反照,常温水浴锅,微波炉,微量样板,三羟异丙基苯胺基甲烷,氢氯酸,醋酸钠,EDTA,琼脂糖,四溴苯酚磺酞,胡米溴铵。

五、试验步调

1、镶嵌电泳疗法槽

洗涤了电泳疗法凝胶层。,吹干,用胶带封住两端的启齿。,穿不景气的凳,皱缩战利品梳。

2、琼脂糖凝胶的准备

琼脂糖在电泳疗法缓冲解决中使终止。,(琼脂糖实质),1-25kb上浆的DNA与1%凝胶,为20-100kb DNA凝胶,200-2000bp的DNA用的凝胶)置微波炉或纰漏浴中保暖的至完整溶解(不要保暖的至疖子),摇浮现。

3、灌胶

将琼脂糖解决冷冻至60度,那么不费力地倒在下面。。

4、琼脂糖凝胶凝结后,电泳疗法缓冲解决累积而成电泳疗法槽中。,那么皱缩卷起。。

5、加样

DNA范本和范本把缓冲液加入为4。:混合后的1,场地用微量吸管累积而成战利品罐中。,每单元添加10-20升,记载战利品挨次和范本上浆。。

6、电泳疗法

镶嵌电极,战利品孔的一面之词衔接到负电极。,另一面之词与正电极贯。,翻开电源,压程度到5V /公分,电泳疗法1-3hr,当蓝移到凝胶前1-2cm,中止电泳疗法。

7、能染上颜色与检查

取出凝胶,放在拿胡米溴铵的能染上颜色液中能染上颜色30min,它可以254nm紫外线辐射灯下检查,桔子荧光灯带的席位,更确切地说,DNA带,在紫外线辐射光下记载了电泳疗法身负重担的人。。胡米溴铵是一种致癌剂,处理或负责时要谨慎。,葡萄汁戴手套。。

附:

⑴5×TBE(tris-硼酸及EDTA)缓冲解决的规划(1000ml):

Tris  54g,硼酸,mol/LEDTA 20ml,调pH值,定容至1000ml,冷藏库保在摄氏4度,每时每刻间浓缩10次。

战利品缓冲解决的准备:

四溴苯酚磺酞,40%(w/v)形成糖水解决,冷藏库保在摄氏4度。

溴化乙锭的准备:

溴化乙锭,在10千分之一升的水溶性,大娘精髓类在10mg/ml浓度准备终极,冷藏库保在摄氏4度。能染上颜色时,吸取L的母液,水进入250ml,终极浓度为,混合平等。

100次TE缓冲解决的准备:

1mol/LTris-HCl(),100mmol/LEDTA

称取,EDTA-Na

2

37.23g,与800ml双蒸馏水,保暖的、搅拌、使终止,那么用氢氯酸程度pH值至(添加氢氯酸20ml),那么把它至1000ml。

电泳疗法缓冲解决的准备100次:

4mol/LTris-HCl(pH8..0),2mol/L醋酸钠,200mmol/LEDTA

称取,无水醋酸钠,EDTA-Na

2

37.23g,先用400ml双蒸水保暖的、搅拌、使终止,那么用冰醋酸程度pH(添加冰醋酸50ml),那么拿着它到500ml。每时每刻间浓缩100次。

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